PCR实验方法步骤(pcr实验步骤详细)。

PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途,下面小编就向大家介绍PCR实验方法步骤:

方法

在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      

10×PCR buffer                    

5 μl     dNT较师律刚织P mix (2mM)              

4 μl     引物1(10pM)                  

2 μl     引物2(10pM)                  

2 μl     Taq酶 (2U/μl)                

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)   

1 μl      加ddH2O至 50 μl   

视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

来自调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,最后在72℃ 保温7min。

结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

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